WHO關(guān)于用于實(shí)驗(yàn)室診斷的A/H5型流感病毒感染的人體標(biāo)本收集的指導(dǎo)方針
一般信息
呼吸道病毒的診斷取決于高質(zhì)量標(biāo)本的采集,并將它們快速運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室以及在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室測(cè)試之前采取適當(dāng)?shù)谋4娲胧T诎芨腥镜募?xì)胞和分泌物的標(biāo)本中最易檢測(cè)到病毒。用于直接病毒抗原或核酸檢測(cè)的標(biāo)本以及用于細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒的標(biāo)本最好在臨床癥狀出現(xiàn)之后的三天之內(nèi)采集。
標(biāo)本的類型 很多的標(biāo)本適合于上呼吸道病毒感染的診斷:
1. 鼻拭子
2. 鼻咽拭子
3. 鼻咽呼氣
4. 洗鼻液
5. 咽拭子
除了上呼吸道的拭子之外,對(duì)于臨床表現(xiàn)有下呼吸道病毒感染的診斷可采用以下一些措施:
1.經(jīng)氣管呼氣
2.支氣管灌洗
3.肺組織活檢
4.肺或氣管組織.
用于實(shí)驗(yàn)室診斷的高致病性A/H5 型禽流感病毒的幾種比較好的標(biāo)本依次為:
1. 鼻咽呼氣
2. 急性期血清
3. 康復(fù)期血清.
通過(guò)用免疫熒光法對(duì)受到感染的細(xì)胞進(jìn)行病毒抗原的直接檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)冷凍并在1至2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行。用于商業(yè)性測(cè)試的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)遵照制造商的指導(dǎo)而進(jìn)行保存。用于病毒分離的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)在采集后及時(shí)冷凍,并盡可能快地接種到受感染細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)。如果標(biāo)本不能夠在48至72小時(shí)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),它們應(yīng)當(dāng)在-70oC或-70oC之下進(jìn)行冷凍保存。呼吸道標(biāo)本應(yīng)當(dāng)使用病毒運(yùn)送介質(zhì)中進(jìn)行收集和運(yùn)送。現(xiàn)在市場(chǎng)上可以購(gòu)買到能夠妥善保存各種病毒的介質(zhì)。
標(biāo)本采集的過(guò)程所需要的器材 :
1.取痰或粘液器
2.酯纖維結(jié)構(gòu)的涂藥器
3. 塑料瓶??壓舌板
4.15-ml 的離心管
5. 采樣杯或器皿
6.移液管
病毒運(yùn)送介質(zhì)
(A) 用于收集咽和鼻拭子的病毒運(yùn)送介質(zhì) 1. 加入10 g 牛肉湯 和 2 g 牛血清蛋白到的400ml的重蒸餾水中。 2. 加入 0.8 ml 慶大霉素硫酸鹽溶液(50 mg/ml) 和 3.2 ml 兩性霉素 B (250 μg/ml) 3. 過(guò)濾消毒。
(B) 洗鼻液容器 1. 消毒的鹽(0.85% NaCl)。
標(biāo)本收集的準(zhǔn)備工作
臨床標(biāo)本應(yīng)當(dāng)遵照以下方針進(jìn)行收集并裝入運(yùn)送容器中,詳見(jiàn)http://webitpreview.who.int/entity/csr/disease/avian_influenza/guidelines/en/Humanspecimens.pdf 。
鼻或鼻咽拭子可入入同一病毒運(yùn)送介質(zhì)中。在可能的情況下,以下的信息可填入現(xiàn)場(chǎng)資料收集表中 : 病例的一般情況, 標(biāo)本的類型, 所收集的資料, 填寫(xiě)此表人的聯(lián)系方式等。 在此過(guò)程中應(yīng)當(dāng)一直采取標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施,從病例體上采集標(biāo)本時(shí)實(shí)行屏障式保護(hù)措施。
鼻拭子:用干的聚酯拭子插入鼻腔中,與上腭平行,并停留幾秒鐘。然后慢慢地旋轉(zhuǎn)式抽出。用同一拭子采集兩側(cè)鼻腔的標(biāo)本。拭子末端放入有2-3ml的病毒運(yùn)送介質(zhì)的瓶中,并將剩余部分折斷。
鼻咽拭子:用柔軟的、帶柄的聚酯拭子插入鼻腔中并至鼻咽部停留幾秒鐘。然后慢慢地旋轉(zhuǎn)式抽出。另外用一拭子采集另一側(cè)標(biāo)本。拭子的末端放入含有2-3ml的病毒運(yùn)送介質(zhì)的瓶中,并將剩余部分折斷 。
鼻咽呼氣:鼻咽部的分泌物通過(guò)所連接的導(dǎo)管呼出到一個(gè)粘液收集器中,并產(chǎn)生真空。導(dǎo)管與上腭平行插入鼻腔中。產(chǎn)生真空后將導(dǎo)管慢慢地旋轉(zhuǎn)式取出。另一鼻腔的粘液也用同一導(dǎo)管以同樣的方式采集。兩側(cè)的鼻咽部的粘液收集后,用3ml的運(yùn)送介質(zhì)沖洗導(dǎo)管。
洗鼻液:病人坐在舒適的位置,頭略微地向后傾斜,并建議在用洗滌液(通常為生理鹽水)沖洗鼻腔時(shí)讓病人說(shuō)“K”而使其咽部閉合。通過(guò)移液管在一側(cè)鼻腔中一次加入1-1.5ml的沖洗液。然后讓病人向后仰頭,并讓沖洗液流入采樣杯中。在另一側(cè)鼻腔重復(fù)此過(guò)程。重復(fù)直到一共使用了10-15ml沖洗液。用運(yùn)送介質(zhì)中將大約3ml的沖洗液按1:2稀釋。
咽拭子:兩側(cè)扁桃體以及后咽用拭子用力搽拭,并按上述方式將拭子放入運(yùn)送介質(zhì)中。
用于流感診裝的血清標(biāo)本收集
急性期的血清標(biāo)本(3-5 ml 全血)應(yīng)當(dāng)在臨床癥狀出現(xiàn)后立刻采集,并且不能拖延至七天之后。恢復(fù)期的血清標(biāo)本應(yīng)當(dāng)在癥狀出現(xiàn)的14天之后采集。病人臨死前 應(yīng)當(dāng)采集第二份標(biāo)本。盡管單份的血清標(biāo)本不能夠在單個(gè)病例的診斷中提供結(jié)論性的證據(jù),但是在癥狀出現(xiàn)后兩周以上采集的標(biāo)本,在中和測(cè)試中對(duì)禽流感抗體的檢測(cè)是十分有用的。
譯自www.who.int
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