人禽流感標本采集及實驗室檢測技術要點(12月2日)
近期,我中心在處理湖南、安徽3例人感染高致性禽流感病例的過程中,對人禽流感病例標本的采集及實驗室檢測技術有幾點體會,供大家參考。
一、盡早采集病人的呼吸道標本
要及時、規范的采集不明原因肺炎或可疑人禽流感病例的呼吸道標本。最佳采集時間為發病后3天內,如錯過最佳時間,仍應盡早采集,一般采集7天內標本。如果第一份標本核酸檢測陰性,應立即再次采集呼吸道標本。上呼吸道包括鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液;下呼吸道標本包括呼吸道吸取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標本。下呼吸道標本最有利于分離到禽流感病毒。
標本采集后要在病人床旁或現場分裝成一式三份,以防止交叉污染,其中兩份送中國疾病預防控制中心進行檢測、備份與復核。
二、血清標本
如果沒采集到用于核酸檢測和病毒分離的急性期標本,人禽流感病例的診斷或排除需雙份血清,急性期血清在發病后7天內采集,恢復期血清在發病后第2、3、4周采集。如未能采集到急性期血清,仍應盡早采集第一份血清,并在間隔2~4周后采集第二份血清。采集量要求5ml,以空腹血為佳。
三、對于死亡的可疑人禽流感病例盡可能獲得尸檢標本
若病人死亡,依據《傳染病防治法》,做好病人家屬的思想工作,同時提前做好準備,盡早進行解剖,采集肺、氣管、肝臟等多器官組織標本。
四、開展人禽流感標本采集和檢測工作要達到相應的生物安全要求
采集病人的標本要采取二級防護措施,人禽流感標本的處理、實驗室檢測要在生物安全二級或三級實驗室操作。
五、采取適宜的實驗室檢測方法
具備資質的各省級實驗室首先應用RT-PCR或Real-Time PCR,對采集的上呼吸道、下呼吸道和尸檢標本進行禽流感病毒核酸檢測。有條件的省份可進行病毒的分離、鑒定和微量中和試驗。
六、標本的保存和送檢
用于病毒分離和核酸檢測的標本應盡快在24小時內進行檢測,24小時能檢測的標本可置于4℃保存,如不能于24小時內接種的標本則應置于-70℃或以下保存。血清可在4℃存放3天,-20℃以下長期保存。標本應避免反復凍融。標本的包裝上要注明樣本編號、姓名及采樣日期。符合上送要求的標本要在24小時內送中國疾控中心。
各省需要向中國疾病預防控制中心送檢標本時,應先與中國疾控中心疾病控制與應急處理辦公室聯系(電話、傳真:010-83153724)。具體要求見中疾控疾發[2005]526號文件中《疑似人禽流感/不明原因肺炎病例標本送檢、接收、檢測和結果報告反饋工作流程》。
中國疾病預防控制中心
2005年12月2日
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