新冠病毒核酸檢測你知道多少?
一 為什么要進行核酸檢測?
新冠病毒感染后會在患者體內復制和擴增,在病毒侵襲的組織和器官內會存在一定量的病毒,同時被感染者會由于生活、工作等原因在其接觸的食物、空氣、水體、物體表面留下病毒。因此可以從人體部位、食品、空氣、水體及物體表面采集標本,通過特定的方法檢測其中是否存在新冠病毒核酸以及核酸含量的高低來鑒定和評估其是否被病毒感染、感染的程度及其環境污染的狀況。特別是對一些新型冠狀病毒攜帶者(新冠病毒核酸檢測陽性但無明顯臨床和影像學表現,且血清特異性新冠病毒抗體陰性者),核酸檢測是確診新冠病毒感染的金標準。另外,當前我國疫情防控的重點,已從對本土病例的防控轉變為對境外輸入性病例的防控以及冷鏈運輸進口物品攜帶污染及密切接觸人群的監測,因此,新冠病毒核酸檢測成為了我國精準防控的重要手段。
二 新冠病毒核酸檢測的方法主要有哪些?
目前國家藥品監督管理局(National Medical Pro- ducts Administration,NMPA)批準上市的新冠病毒核酸檢測試劑盒所采用的檢測方法主要有實時熒光 PCR法、恒溫擴增法、聯合探針錨定聚合測序法、雜交捕獲免疫熒光法、RNA 捕獲探針法、RNA 恒溫擴增捕獲—金探針層析法、雙擴增法以及基于下一代測序技術(next-genera-tion sequencing,NGS)的新冠病毒核酸檢測方法等。
實時熒光 PCR 法是目前開展新冠病毒核酸檢測最主要的方法,靈敏快速,其檢測下限為10~103copies/mL,部分產品可達10 copies/mL。該方法檢測耗時存在差異,通常兩步法約需3~3.5h,一步法可縮短至1h 以內。恒溫擴增實時熒光法是將恒溫擴增技術和實時熒光檢測技術相結合,可將新冠病毒核酸檢測全流程時間縮短至1.5h 以內。恒溫擴增芯片法是將恒溫擴增技術與微流控芯片技術相結合,其特點是可在同一份樣本中同時檢測多種病原體。恒溫擴增法具有集成能力強、自動化程度高、檢測時間短、檢測下限低(可達 102copies/mL) 等特點。基于下一代測序技術(NGS)的新冠病毒核酸檢測不依賴傳統的微生物培養,具有高通量、一次可檢測多個靶基因的特點,可發現新發病原體、監測病原體變異,為診斷試劑、疫苗、藥物等研發和應用提供依據。在此次疫情初期,利用NGS從臨床樣本中成功鑒定出了新冠病毒的基因組序列,為新冠病毒的早期發現和診斷提供了重要依據。但目前NGS成本較高、平臺不通用、缺乏統一的實驗室操作規范和評價標準,因此主要用于科研,其臨床大規模應用需進一步標準化和規范化。
三 為什么核酸檢測會出現假陽性和假陰性?
雖然核酸檢測是新冠病毒病原學診斷的金標準,但仍存在一定的局限性。當臨床高度懷疑新冠病毒感染而核酸檢測陰性時,需結合患者肺部 CT、 新冠病毒特異性抗體、血常規等其他檢測結果進行綜合判斷。假陽性結果多由實驗室污染或操作不當造成。假陰性結果主要原因∶(1)感染的不同時期,病毒在人體不同部位載量存在差異;(2)樣本采集不規范;(3)樣本轉運、保存或滅活方法不當,導致 RNA 降解;(4)病毒基因序列發生變異。
微生物檢驗科 向星宇供稿
2021.2.7
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