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登革熱實驗室檢測
確診登革熱病毒感染的實驗室檢測方法包括分離登革病毒、檢測病毒的核酸、抗原或抗體或幾種檢測方法的聯合使用。從病人標本中分離到登革病毒，檢測到病毒核酸、抗原，血液中IgM抗體陽轉，或恢復期血標本IgG抗體滴度較急性期有4倍或以上升高可以確診登革病毒感染。單份血標本IgM或IgG抗體陽性不能確診登革病毒感染，單份標本抗體檢測陽性時，僅可臨床診斷為疑似或可能病例，確診需要急性期和恢復期雙份血清標本。
（一）登革病毒感染與機體免疫反應
登革病毒感染后，潛伏期為3～14天，通常4～7天，潛伏期內采集的患者標本尚不能檢出登革病毒或相應的機體免疫反應。發病后，病毒在血液中存在的時間（病毒血癥期）約為7天，病毒NS1抗原在血液存在的時間略長。發病后4～5天內，可在病人的血清、血漿、白細胞、腦脊液和尸檢組織標本中分離到病毒，病毒核酸及NS1抗原在這個時期的檢出率高。病人血液中抗體水平，因個體免疫狀態不同而具有顯著差異。若以前沒有感染過登革病毒或其他黃病毒，或接種過黃病毒疫苗（如：乙腦、黃熱等），病人首次感染抗體免疫反應呈現為特異性抗體水平緩慢升高，IgM抗體出現最早，隨后出現的是IgA和IgG抗體。在發病后3～5天的患者中IgM抗體檢出率約為50%，發病后第5天的患者中檢出率約為80%，而在發病后第10天患者中，約99%的患者可檢出。IgM抗體水平在發病后2周達高峰，然后逐步下降，可保持2～3個月。IgA抗體出現略晚于IgM抗體，可保持約45天。在發病一周后，可在血液標本中檢出較低滴度的IgG抗體，之后抗體滴度緩慢升高，可持續存在多月甚至終生。如果病人屬于再次感染登革病毒（登革病毒感染者以前曾感染過登革病毒，有時可能是曾接種其他黃病毒疫苗或感染過其他黃病毒），抗體滴度可快速升高并可和多種黃病毒產生反應。主要為高水平的IgG抗體，在急性期即可檢出，可持續存在10個月以上，甚至終生。IgA抗體也可在急性期標本中檢出。再次感染登革病毒的病人恢復期早期的IgM抗體滴度明顯低于首次感染，甚至無法檢出，通過計算IgM/IgG抗體比例，可以區分首次或再次登革病毒感染。IgA抗體檢測試劑在臨床診斷中的應用尚處于評價階段。
（二）檢測方法選擇
在發病的早期（發病5天內）一般采用病毒分離、核酸檢測或抗原檢測等方法進行診斷，當病程進入恢復期后（發病5天以后），一般采用血清學檢測病毒特異性抗體的方法進行診斷。
1. 病毒分離。經細胞培養分離病毒，需要生物安全二級（BSL-2)實驗室及必要的儀器設備，在標本運輸過程中保持低溫（冷凍或冷藏）對于病毒分離非常重要。將標本接種于蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以后，用檢測抗原或核酸的方法鑒定病毒。分離到登革病毒可以確診，但其耗時長，需要數天，不適于快速診斷。
2. 核酸檢測。多種逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法可用于登革病毒核酸檢測，包括一步法RT-PCR、實時熒光RT-PCR或套式RT-PCR等方法等。核酸檢測可在1～2天內鑒別病毒RNA。在病人標本中檢出病毒核酸，可確診且能分型，可用于早期診斷，但核酸檢測容易因污染而產生假陽性，因此要求嚴格分區操作。陰性結果不能排除登革熱診斷，需采集第二份標本（發病5天后）開展血清學檢測，進行確診。
3. 抗原檢測。NS1抗原檢測可采用ELISA方法或快速檢測試劑，可在幾十分鐘到數小時完成檢測，適于現場使用，是登革熱急性期診斷的重要手段，在發病后1天即可檢出，也有報道在發病后18天仍可在血標本中檢出。目前該方法尚不能分型。由于NS1抗原檢測方法的特異性，也可用于黃病毒感染的鑒別診斷。基于我國登革熱流行的特點，國家衛生計生委頒發的《登革熱診療指南（2014年第2版）》將標本中檢出NS1抗原作為確診病毒感染依據，可用于早期診斷。但綜合現有試劑的穩定性和特異性以及現場疫情處置需要等因素考慮，《登革熱診斷標準WS 216-2018》將標本中檢出NS1抗原作為臨床診斷病例標準而非確診病毒感染依據。NS1抗原檢測陰性結果不能排除登革熱診斷，需采集第二份標本（發病5天后）開展血清學特異性抗體檢測，進行確診或排除診斷。
4. IgM抗體檢測。用于IgM抗體檢測的捕獲法ELISA（MAC-ELISA）是最常用的檢測方法，也有多種商業化快檢試劑可用于IgM抗體檢測，均不能用于血清分型檢測。目前檢測試劑主要是檢測病毒包膜蛋白特異性抗體，主要缺陷為與其他黃病毒存在交叉反應。標本中IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染登革病毒，適用于登革熱早期診斷，但單份標本不能確診。一些登革病毒再次感染者，血標本中IgM抗體滴度底，甚至不能檢出，影響IgM抗體診斷精確性。
5. IgG抗體檢測。可采用ELISA、免疫熒光（IFA）、免疫層析等方法檢測。登革病毒IgG抗體與其他黃病毒有交叉反應。IgG抗體檢測可以用來鑒定首次感染和再次感染，如果急性期標本IgG抗體陰性，恢復期陽轉，則可確定為首次感染；如果急性期患者血標本中IgG/IgM比值明顯升高（受抗體檢測試劑盒敏感性影響，尚無明確的指示值），或發病后3天內IgG水平明顯升高，提示再次感染；患者恢復期血標本IgG抗體滴度較急性期(兩份標本間隔應不少于7天）呈4倍及以上升高可確診為登革病毒感染。采集第二份標本進行確診或排除診斷對于登革熱防控具有重要意義，尤其是非流行區。
6. 中和抗體檢測。空斑減少中和實驗（Plaque Reduction and Neutralization Test，PRNT）和微量中和實驗可用來檢測血清中的中和抗體，是型特異的血清學檢測方法，可以分型。需要生物安全二級（BSL-2)實驗室及必要的儀器設備，耗時長，需要數天，不適于快速診斷。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高可以確診。
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