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寨卡病毒實驗室檢測技術方案
寨卡病毒(Zika Virus)屬黃病毒科（Flaviviridae）黃病毒屬（Flavivirus），呈球形，直徑約為40-70nm，有包膜。基因組為單股正鏈RNA，長度約為10.8Kb，可分為亞洲型和非洲型兩個基因型。
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。
一、檢測對象
（一）疑似和臨床診斷病例。
（二）伊蚊成蚊和幼蟲。
二、樣本采集、保存和運輸
（一）病例標本采集
對懷疑感染寨卡病毒的患者，要盡早采集血標本，同時要采集尿液和唾液標本。如果臨床高度懷疑男性為寨卡病毒病，在上述標本無法確診時，可考慮采集精液開展檢測。
血液標本采集辦法：用無菌真空干燥管，采集患者非抗凝血5 ml，及時分離血清，分裝2管，保存于帶螺旋蓋、內有墊圈的凍存管內，標記清楚后低溫保存，其中1管用于現場實驗室檢測，1管用于上級疾病預防控制機構復核。對病例應盡可能采集雙份血液標本，兩份標本之間相隔14天為宜，住院病例可于入院當天和出院前1天各采集一份。
尿液標本的采集方法:采集尿液標本10ml，置于無菌50ml塑料尖底離心管中，2000rpm離心5min去沉淀，將上清液分裝至無菌15ml離心管中，每份5 ml。如需采集精液標本，應在采集精液標本前采集尿液標本。
唾液標本的采集方法:將唾液吐入50ml塑料尖底離心管中，4000rpm離心15min去沉淀，將離心后上清液分裝，分裝2管，每份1 ml，保存于帶螺旋蓋、內有墊圈的凍存管內后保存。
采集精液開展實驗室檢測時，需采集標本1～2 ml，置于無菌干燥、帶螺旋蓋、內有墊圈的凍存管內后保存。
（二）蚊媒標本采集
疫點內采集的伊蚊成蚊及幼蟲，分類鑒定后，填寫媒介標本采集信息表，按照采集地點分裝，每管10～20只。
（三）標本保存、運送
如標本能夠在24小時內開展實驗室檢測，應將標本置于2～8℃保存；不能及時檢測的標本應盡快置于-70℃以下保存。
標本運送時采用低溫冷藏運輸，避免凍融，樣本運輸應遵守國家相關生物安全規定。
三、檢測方法
寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要采用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時，主要對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測和病毒分離。
開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
（一）臨床標本檢測
1．病原學檢測
病原學檢測主要適用于急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。
（1）核酸檢測：采用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。可采用中國疾病預防控制中心病毒病所發放的熒光定量PCR試劑或其他商品化試劑盒進行檢測。
（2）病毒分離：將標本接種于蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變或5～7天以后，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2．血清學檢測
（1）血清特異性IgM抗體：發病3天后可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天后檢出率高。可采用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易于產生假陽性。
（2）中和抗體：采用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。
3．其他標本檢測
尿液、唾液和精液標本的檢測可用血清病毒RNA提取試劑盒及核酸特異性檢測試劑進行檢測，結果判定同血清標本。
（二）媒介標本檢測
1．標本處理
將分類后的伊蚊成蚊或幼蟲，按照采集地點，每10～20只為一份進行研磨處理。
2．病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測。
3．病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。
四、生物安全
寨卡病毒按照第三類病原微生物進行管理。凡涉及寨卡病毒的分離、培養、未經培養的感染材料等的操作應在生物安全二級（BSL-2）實驗室進行；滅活材料和無感染性材料的操作可在生物安全一級（BSL-1）實驗室進行。病毒培養物的運輸應滿足國際民用航空組織公布的《危險物品安全航空運輸技術細則》（Doc9284號文件）A類感染性物資的包裝要求，對應的聯合國編號為UN2814;未經培養的感染性材料（包括患者血、尿液、唾液或動物體液標本以及現場采集的媒介生物標本等）運輸時應滿足B類感染性物質的包裝要求，對應的聯合國編號為UN3373。開展相關運輸活動須按照原衛生部發布的第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規定》進行審批后，方可實施運輸。
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