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急性出血性結膜炎預防控制技術指南（試 行）
急性出血性結膜炎預防控制技術指南
（試 行）
急性出血性結膜炎(acute hemorrhagic conjunctivitis) 也稱為流行性出血性結膜炎，是主要由腸道病毒引起的，以結膜高度充血，常見結膜下出血及角膜上皮點狀剝脫為主要臨床特征的傳染病。一般可在2～3周痊愈，屬于自限性疾病，預后良好。該病全年均可發病，多見于夏秋季，各年齡組人群均可發病。主要通過接觸傳播，傳染性極強，傳播速度快，人群普遍易感，易導致流行或暴發。為指導各地做好急性出血性結膜炎疫情控制工作，制定本指南。
一、病原學
腸道病毒70型（Enterovirus type 70, EV70）和柯薩奇病毒（Coxsackie virus）A組24型變種（CA24v）是急性出血性結膜炎的主要病原體。腺病毒11型也可引起該病。
EV70屬微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae），具有腸道病毒的理化及生物學特性。病毒呈球形，直徑22nm～30nm，基因組為單鏈RNA，蛋白外殼呈對稱排列的20面體，無包膜。病毒在敏感細胞胞漿內繁殖。EV70的分離培養需用人胚腎細胞、人胚結膜組織或HeLa細胞較難分離。不同流行期病毒基因常有變異，可引起世界范圍大流行。CA24v也屬微小RNA病毒科，生物學特性基本同EV70，可用HeLa細胞等多種傳代細胞培養，易分離。曾引起亞洲、中南美等地區大流行。
CA24v 和EV70適合在溫暖、潮濕的環境中生存與傳播，均耐酸、耐乙醚、耐碘苷。75%的酒精是有效的消毒劑。
二、流行病學
（一）傳染源
患者是本病的主要傳染源，其眼部分泌物及淚液均含有病毒。發病后2周內傳染性最強。該病潛伏期一般為12-48小時，最長可達6天。
（二）傳播途徑
該病主要是通過接觸被患者眼部分泌物污染的手、物品或水等而發病，部分患者的咽部或糞便中也存在病毒。
（三）人群易感性
人群普遍易感，各年齡組均可感染發病。可以由不同型別病毒單獨感染發病，也可發生兩種病毒混合感染。病后免疫持久性差，患者病愈后，可以被不同病毒感染而再次發病，亦可能在間隔數年后被同一種病毒再次感染而發病。
（四）流行特征
該病曾在世界范圍內發生多次流行。1969年本病首先在西非加納暴發流行，沿西海岸迅猛蔓延到非洲大部分國家，幾乎同時，印度尼西亞、新加坡、日本、印度等也暴發流行，很快波及亞洲大部分國家及歐洲、中東國家，澳州、美洲也有流行報道。1971年我國首次發生該病的流行，除邊遠地區外，遍及包括香港、臺灣在內的全國各省市。此后，在80年代和90年代，很多國家、地區及我國均有多次地區性小規模流行。柯薩奇病毒A組24型與腸道病毒70型（EV70）可以同時或先后引起流行。
該病全年均可發病，有明顯的季節特點，以夏秋季多見。易在人口稠密、衛生條件差的地區流行，在托幼機構、學校、工廠企業等人群聚集的地方易發生暴發流行。醫院門診的交叉感染和口腔器械消毒不嚴格，也可造成傳播。
三、病例的診斷和治療
各級醫療機構醫務人員可參考《急性出血性結膜炎診療方案》（附件1），進行診療。
四、疫情報告
出血性結膜炎是我國傳染病法規定報告報告的丙類傳染病。各級各類醫療機構發現病例及暴發疫情時，應嚴格按照《中華人民共和國傳染病法》和《突發公共衛生事件與傳染病疫情監測信息報告管理辦法》的規定，進行疫情報告。
五、流行病學調查
疾病預防控制機構接到暴發疫情報告后，可開展流行病學調查，重點調查分析引起暴發、流行的危險因素，闡明疾病傳播的特點，以提高疫情控制措施的針對性。
六、實驗室檢測
發生急性出血性結膜炎暴發或流行時，各地可根據實驗室條件，開展急性出血性結膜炎病原學檢測工作，掌握流行毒株的特征。標本的采集、包裝、運送和檢測可參照《急性出血性結膜炎實驗室檢測方案》（附件2）。
七、預防控制措施
該病沒有特異性的預防措施。發生疾病暴發或流行時，各級醫療衛生機構應在做好病例管理工作的同時，積極開展健康教育，指導公眾做好個人預防，保持良好個人衛生習慣。
（一）對病人進行規范治療，防止眼部并發癥發生，病人一般不需住院治療。
（二）病人病后7～10天內，應盡量居家治療休息，減少公共場所活動。
(三) 病人接觸過的物品應擦拭消毒、煮沸消毒或開水澆燙。病人的洗漱用品要嚴格做到與其他家庭成員或同居室人員分開，不能混用，避免交叉污染。如接觸病人使用過的物品，應充分清潔或消毒手部。
（四）發生疾病暴發或流行時，學校和托幼機構要強化晨檢制度，工廠等集體機構要建立健康檢視制度。一旦發現病人，應要求病人脫離學習、工作環境，居家治療休息。
（五）醫療機構應加強預檢分診和消毒措施的落實。醫務人員檢治病人后，必須認真消毒雙手，未對雙手消毒前，不得再接觸其他病人。診療病人過程中所使用的儀器、物品要擦拭消毒。疾病流行期間，醫院應專辟診室或診臺接診病人，避免交叉感染。
（六）加強對游泳池、浴池、理發室、旅館的衛生管理與監督。勸阻患者進入公共場所或參與社交活動。暴發流行期間，相關管理部門可根據疫情控制需要，關閉游泳池、浴池等公共場所。
（七）平時要加強健康教育，普及手衛生和愛眼護眼知識，養成勤洗手、不共用毛巾臉盆等個人生活用品的衛生習慣。
（八）一般不宜采用集體滴眼藥等方式，進行該病的群體預防。
附件：
附件1急性出血性結膜炎診療方案
附件2急性出血性結膜炎實驗室檢測方案
附件1
急性出血性結膜炎診療方案
一、診斷
根據流行病學、病史、臨床癥狀、體征，結合一般實驗室檢查對急性出血性結膜炎作出臨床診斷。
（一）診斷依據
1．流行病學史
1.1 本病易導致流行或暴發，以夏秋季常見。
1.2患者多有明顯的接觸感染史。健康人可經接觸患者眼部分泌物污染的手、物品或水而感染。
2.臨床表現
2.1 臨床癥狀：潛伏期短，起病急劇，自覺癥狀明顯，雙眼先后或同時患病；有劇烈的異物感、眼紅、眼刺痛、畏光、流淚等刺激癥狀；早期分泌物為水性，重者帶淡紅色，繼而為粘液性。
2.2 體征：眼瞼紅腫，瞼、球結膜中、高度充血，多伴結膜下點、片狀出血。早期角膜上皮點狀剝脫，熒光素染色后裂隙燈檢查可見角膜彌漫散在細小點狀著染。
3．實驗室檢測
3.1 結膜細胞學檢查見單核細胞反應為主，以排除細菌性感染。
3.2 結膜拭子涂擦或結膜刮取物培養分離出病毒，并應用微量中和實驗鑒定為CA24v或EV70（見附件2）。
3.3 結膜細胞涂片或細胞培養物涂片間接免疫熒光技術檢測，查見CA24v或EV70抗原（見附件2）。
3.4 雙相血清學檢查，病人恢復期血清抗CA24v或抗EV70抗體比急性期血清抗體滴度升高≥4倍（見附件3）。
（二）診斷原則
根據流行病學、病史、臨床癥狀、體征，結合結膜細胞學檢查作出臨床診斷。
根據病原學檢查分離出CA24v或EV70病毒；或間接免疫熒光技術檢測出病毒抗原；或雙相血清學檢查，患者恢復期血清特異性中和抗體滴度較急性期血清特異性中和抗體滴度升高≥4倍，結合臨床診斷進行確診。
（四）診斷標準
疑似病例：應同時符合1和2；
臨床診斷病例：應同時符合1、2和3.1；
確診病例：應同時符合1、2及3.2、3.3、3.4中任何一項。
(五) 鑒別診斷
與流行性角結膜炎、急性卡他性結膜炎、衣原體性結膜炎相鑒別。
1．流行性角結膜炎：常由腺病毒8、19、37等亞型感染引起。潛伏期5～12天，接觸傳染，傳染性強，可暴發或小范圍流行，常年均可見散發病例。可先有上呼吸道感染、發熱史。結膜明顯充血、水腫，濾泡增生，少數可引起不同程度的結膜下出血。水樣分泌物，常伴偽膜形成。耳前淋巴結腫大。起病7～10天內，出現淺層點狀角膜炎，2周左右角膜中央出現數目不等的上皮下圓形浸潤斑點，影響視力。角膜損害可持續數月或數年后消失或遺留云翳。
2．急性卡他性結膜炎：由細菌感染引起，潛伏期1～2天，常見的致病菌為肺炎鏈球菌、Koch-Weeks桿菌，流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌等。屬接觸傳染，表現為結膜充血、水腫，粘液膿性分泌物，一般不波及角膜。如由Koch-Weeks桿菌或肺炎鏈球菌感染，結膜可出現小點狀出血。
3．衣原體性結膜炎：由衣原體感染引起的急性濾泡性結膜炎，潛伏期3～4天。表現為眼瞼紅腫、結膜高度充血、乳頭增生、穹隆部布滿濾泡。另外也可通過成人衣原體性生殖泌尿系感染的分泌物或污染的游泳池水引起。病程持續數周至數月。
二、治療
臨床上可用抗病毒眼液如0.5％病毒靈眼液，5％嗎啉雙胍眼液，魚腥草滴眼液，開始時每小時一次，3天后逐漸減少次數，晚間涂更昔洛韋眼膏或抗生素眼膏。有角膜上皮病變的患者加用表皮生長因子眼液或眼表面潤滑劑或人工淚液促進上皮修復及保護上皮。
有前房炎癥時加用散瞳劑或非甾體抗炎藥。
中藥金銀花、野菊花、板藍根、桑葉、薄荷等熱熏敷或提取液滴眼對緩解癥狀有一定療效。
眼分泌物多時，可用溫生理鹽水或3%硼酸液清洗結膜囊。
抗生素、磺胺藥可以作為預防混合感染或繼發細菌感染用藥。
三、預后
該病病程呈自限性，自然病程為1～3周，一般預后良好，但偶有出現神經系統并發癥。
附件2
急性出血性結膜炎的實驗室檢測
一、病毒的分離與鑒定
（一）標本的采集、運送和保存
1．患眼結膜囊淚液、分泌物是分離CA24v、EV70的主要標本。標本采集應在起病1～3天以內。
2. 用滅菌棉拭子涂擦翻轉的上、下瞼結膜并拭取淚液立即投入裝有滅菌生理鹽水或Eagle液或0.5%水解乳蛋白Hanks液2mL的小試管中，貼好標簽，置冰壺內攜至實驗室或低溫（-20℃～-70℃）凍存。
（二） 病毒分離
1． 取出標本，無菌條件下揉洗棉拭子，壓擠出標本液，加10％青霉素、鏈霉素（原濃度青霉素、鏈霉素各1萬u/mL），置4℃作用4h后用作病毒分離。
2. 細胞培養用生長單層的HeLa細胞或人胚肺二倍體細胞或其他敏感細胞，生長液為10%牛血清Eagle液，含青霉素100u/mL，鏈霉素100u/mL，pH7.2-7.4。
3．傾去細胞管內生長液。每細胞管接種標本液0.2mL吸附10min。每份標本液接種4個細胞管。加維持液（含2%牛血清的Eagle液，PH 7.2～7.4）0.8mL/管。余標本液置-20℃或-70℃凍存。細胞對照管4管，每管加維持液1.0mL。 37℃溫箱靜置培養。每日光學顯微鏡下觀察細胞病變。3-4天更換維持液一次，連續觀察7天。
4．細胞管出現細胞病變，表現為細胞圓縮、分散、胞漿內顆粒增加，最后細胞自管壁脫落，為分離陽性結果。細胞病變達“+++ - ++++”時，將細胞收留凍存于-20℃或-70℃，備TCID50滴定及病毒鑒定。第1代培養見可疑細胞病變時繼續傳代，待細胞病變穩定出現后-20℃或-70℃凍存。第1代培養培養7日不出現細胞病變時連續盲傳2代，如仍無細胞病變則分離結果為陰性。
（三）病毒TCID50滴定
1．陽性細胞管凍融3次。2000rpm離心10分鐘，吸取上清，加 Eagle液10倍系列稀釋為10-1至10-8病毒液，各加入細胞板內，每孔25μl，每稀釋度4孔細胞。
2．每孔加細胞懸液25μl，同時設細胞對照（25μl稀釋液+25μl 細胞懸液）， 37℃培養7天，觀察細胞病變。
3．按Reed-Muench法計算出分離病毒株的TCID50。
（四）病毒鑒定（微量中和實驗）
1．將CA24v或EV70的標準血清稀釋至20個單位（例如：血清效價為1:160時，進行1:8稀釋）。
2． 在96孔細胞培養板中每孔加入20個單位的標準抗血清25μl和100個TCID50病毒25μl，37℃作用1小時，最后加入HeLa或其它敏感細胞懸液25μl。同時設以下對照：
（1）病毒滴度核實對照：第一孔加100個TCID50病毒25μl，從第二孔開始進行倍比稀釋病毒最后每孔加稀釋液25μl 及細胞懸液25μl；
（2）陽性對照：加100個TCID50病毒25μl 、稀釋液25μl 和細胞懸液25μl；
（3）陰性對照：加稀釋液50μl 和細胞懸液25μl；
（4）陰性血清對照：每孔加 100個TCID50病毒25μl 、不含特異性抗體的血清25μl 和細胞懸液25μl；
（5）將細胞板輕輕搖勻，37℃、5％CO2溫箱培養7天。
3．觀察細胞病變，以完全病變為判斷標準，不發生細胞病變的證明其病毒能被標準血清所中和，以此鑒定病毒。
二、間接免疫熒光試驗法
（一）眼結膜細胞涂片
1.用棉拭子取結膜細胞，涂于清潔的玻片上，室溫干燥，冷丙酮于4℃固定10min。
2. 一個患者標本作兩個涂片，分別用抗CA24v及抗EV70單克隆抗體作間接免疫熒光試驗，檢查結膜細胞中的病毒抗原。
（二）細胞培養物涂片
1．眼拭子標本接種于細胞培養管中，出現可疑細胞病變時，取其中一管用毛細吸管吹打下細胞，經PBS洗滌做細胞涂片，室溫干燥，冷丙酮固定。
2．分別用抗CA24V及抗EV70單克隆抗體作間接免疫熒光試驗檢查病毒抗原，既可以確定分離是否為陽性，又可以及時鑒定出病毒型別。
（三）間接免疫熒光試驗法
1．上述結膜細胞涂片或病毒分離涂片，分別加適當稀釋的抗CA24v及抗EV70單克隆抗體，將玻片置于37℃濕盒內30min。
2．取玻片用pH 7.2-7.4的PBS洗滌3次，每次3min-5min。
3．加適當稀釋的抗鼠IgG熒光素結合物，置于37℃濕盒內30 min。
4．取出玻片，同上法用P.B.S洗滌3次，加50%中性甘油P.B.S封片鏡檢，在熒光顯微鏡下細胞漿內見黃綠色熒光為陽性。
5．在實驗中設陰性或陽性對照。
（三） 血清學檢查
1.發病1～3天內采取患者急性期血清，發病后2～4周采取恢復期血清，分別-20℃凍存備檢。
2．雙份血清1:5稀釋，56℃，30分鐘滅活。
3．在96孔細胞培養板上將上述血清從1:5開始倍比稀釋至1:1280，每孔量為25μl。
4．每孔加100個TCID50病毒25μl，37℃作用1小時，加細胞懸液25μl，置37℃、5%CO2溫箱培養7天。以完全病變為判斷標準，與哪型病毒中和即判斷為該型病毒感染。
5．光學顯微鏡下觀察細胞病變，以不產生細胞病變的血清最高稀釋度的倒數為終點效價。
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